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J-GLOBAL ID：201802266025445311   整理番号：18A1112688

蛍光相関分光法を用いたTDP-43の一本鎖DNAへの基質認識状態の分析【JST・京大機械翻訳】

Analysis of the substrate recognition state of TDP-43 to single-stranded DNA using fluorescence correlation spectroscopy

著者 (5件)： Kitamura Akira (Laboratory of Molecular Cell Dynamics, Faculty of Advanced Life Science, Hokkaido University, Sapporo 001-0021, Japan) ,  Shibasaki Ai (Laboratory of Molecular Cell Dynamics, Faculty of Advanced Life Science, Hokkaido University, Sapporo 001-0021, Japan) ,  Takeda Kayo (Laboratory of Molecular Cell Dynamics, Faculty of Advanced Life Science, Hokkaido University, Sapporo 001-0021, Japan) ,  Suno Ryoji (Department of Cell Biology, Graduate School of Medicine, Kyoto University, Kyoto 605-8501, Japan) ,  Kinjo Masataka (Laboratory of Molecular Cell Dynamics, Faculty of Advanced Life Science, Hokkaido University, Sapporo 001-0021, Japan)
資料名： Biochemistry and Biophysics Reports  (Biochemistry and Biophysics Reports)
巻： 14  ページ： 58-63  発行年： 2018年 
JST資料番号： W3090A  ISSN： 2405-5808  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： オランダ (NLD)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： トランス活性化応答(TAR)DNA/RNA結合蛋白質43kDa(TDP-43)の正常機能と異常凝集は,致死性遺伝疾患,嚢胞性線維症,筋萎縮性側索硬化症(ALS),および前頭側頭葉変性(FTLD)と直接関連する。一本鎖DNA(ssDNA)又はRNAへのTDP-43の結合は転写抑制,RNAスプライシングの調節及びRNA安定化に関与する。TDP-43とssDNAまたはRNAの平衡解離定数(K_d)を種々の方法を用いて決定した。しかしながら,溶液中の少量のTDP-43を用いて短時間で高感度でK_dを測定できる方法は有利である。ここでは,TDP-43および蛍光標識ssDNAのK_dおよび結合化学量論を決定するために,蛍光相関分光法(FCS)を用い,電気泳動移動度シフト分析(EMSA)に加えて,単一分子感度を有する溶液中の分子相互作用の遅い拡散を検出した。グルタチオン-S-トランスフェラーゼとポリヒスチジン標識を二重標識したTDP-43のタンデム親和性クロマトグラフィーを用いて,高度に精製した蛋白質を得た。FCSは,精製TDP-43とTG ssDNA反復の間の特異的相互作用を,ナノモル範囲のK_dで検出することに成功した。TDP-43変異体のK_dは野生型と異ならなかったが,ssDNAと結合しない変異体オリゴマーが観察された。二量化TDP-43/ssDNA複合体当たりの蛍光輝度の分析を用いて,それらの結合化学量論を評価した。結果は,FCSとEMSAを組み合わせたアッセイがssDNA認識機構を正確に分析でき,FCSがTDP-43とssDNAまたはRNA間の相互作用強度の迅速で定量的な決定に適用できることを示唆する。これらの方法は,TDP-43のALSおよびFTLD関連変異体の基質認識機構の解明に役立つであろう。Copyright 2018 Elsevier B.V., Amsterdam. All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 解離定数 ,  筋萎縮性側索硬化症 ,  野生型 ,  複合体 ,  分子間相互作用 ,  *一本鎖DNA ,  *蛍光 ,  オリゴマ ,  RNA【核酸】 ,  蛍光標識 ,  凝集 ,  アフィニティークロマトグラフィー ,  RNA結合タンパク質 ,  二量化
準シソーラス用語： *TDP-43 , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： トランス活性化応答DNA/RNA結合蛋白質43kDa ,  解離定数 ,  結合化学量論 ,  蛍光相関分光法 ,  電気泳動移動度シフトアッセイ

分類 (2件)： 神経系の疾患  (GN03000O) ,  神経の基礎医学  (GN01020W)

タイトルに関連する用語 (5件)： 蛍光相関分光法 ,  TDP-43 ,  一本鎖DNA ,  基質認識 ,  分析