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J-GLOBAL ID：201802275598635111   整理番号：18A1065908

改変ホスホリパーゼDを用いたホスファチジルトレオニンの容易な酵素的合成【JST・京大機械翻訳】

Facile Enzymatic Synthesis of Phosphatidylthreonine Using an Engineered Phospholipase D

著者 (5件)： Damnjanovic Jasmina (Laboratory of Molecular Biotechnology, Department of Bioengineering Sciences, Graduate School of Bioagricultural Science, Nagoya University, Furo-cho, Chikusa-ku, Nagoya, 464-8601, Japan) ,  Matsunaga Nozomi (Laboratory of Molecular Biotechnology, Department of Bioengineering Sciences, Graduate School of Bioagricultural Science, Nagoya University, Furo-cho, Chikusa-ku, Nagoya, 464-8601, Japan) ,  Adachi Masaatsu (Laboratory of Organic Chemistry, Department of Applied Molecular Biosciences, Graduate School of Bioagricultural Sciences, Nagoya University, Furo-cho, Chikusa-ku, Nagoya, 464-8601, Japan) ,  Nakano Hideo (Laboratory of Molecular Biotechnology, Department of Bioengineering Sciences, Graduate School of Bioagricultural Science, Nagoya University, Furo-cho, Chikusa-ku, Nagoya, 464-8601, Japan) ,  Iwasaki Yugo (Laboratory of Molecular Biotechnology, Department of Bioengineering Sciences, Graduate School of Bioagricultural Science, Nagoya University, Furo-cho, Chikusa-ku, Nagoya, 464-8601, Japan)
資料名： European Journal of Lipid Science and Technology  (European Journal of Lipid Science and Technology)
巻： 120  号： 6  ページ： e1800089  発行年： 2018年 
JST資料番号： B0531A  ISSN： 1438-7697  CODEN： EJLST  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： ドイツ (DEU)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： ここでは,ホスファチジルセリン(PtdThr)の直接酵素合成のための新しく確立された方法について述べた。これはこのまれなリン脂質の酵素合成に関する最初の報告である。それは,ホスファチジルコリン(PtdCho)の頭部基がL-トレオニン(L-Thr)に交換される,ホスホリパーゼD(PLD)触媒トランスホスファチジル化を利用する。野生型PLDを用いたPtdChoとL-Thr間の反応を触媒する試みは,おそらくL-Thrの第二ヒドロキシル基が酵素にアクセスできないため,成功しない。Ptd-L-Thrを合成するために,天然PtdThr異性体,イノシトールの二次ヒドロキシル基に対して活性化されたPLD変異体を,L-Thrを受け入れる能力に対してスクリーニングした。6つの変異体が陽性と同定され,そのうち187F/191Y/385L(FYl)が最も高い活性を示した。反応パラメータを最適化した後,Ptd-L-Thr含有量は約30mol%に達した。生成物をカラムクロマトグラフィーにより5.2%の全収率で単離し,その構造をNMRにより確認した。加えて,FYl変異体は,L-Thrだけでなく,スレオニン,L-allo-Thr,およびD-allo-Thrのいくつかの立体異性体にも反応することができた。リガンドドッキングシミュレーションにより,これらの立体異性体に対する酵素の優先性を説明した。L-,L-アロ-及びD-アロ-Thrは生産的配向において酵素の活性部位に結合できるが,D-Thrは反応を進行させない位置に結合する。実際の応用:酵素法はPtdChoとL-トレオニンからPtdThrの一段階合成を保護/脱保護段階なしで可能にし,それにより現在使用されている化学的方法よりもはるかに簡単で有害である。合成されたPtdThrは純粋な形で単離され,その生物学的機能の解明のための試薬として使用される。ホスファチジルセリン(PtdThr)の一段階酵素合成法について述べた。それは,人工ホスホリパーゼD(PLD)により触媒されたトレオニン(Thr)によるホスファチジルコリン(PtdCho)の頭部基交換を用いる。この酵素はThrのいくつかの立体異性体,すなわち,L-Thr,L-allo-Thr,およびD-allo-Thrasを受容し,対応するPtdThrを与えるが,notD-Thrを与える。ドッキングシミュレーションにより,酵素の選択性について説明した。L-,L-アロ-およびD-アロ-Thrは生産的配向で酵素の活性部位に結合できるが,D-Thrは非生産的配向で結合し,反応を進行させることができない。Copyright 2018 Wiley Publishing Japan K.K. All Rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： *ホスホリパーゼD ,  生物活性 ,  最適化 ,  活性部位 ,  *酵素 ,  立体異性体 ,  野生型 ,  NMR【磁気共鳴】 ,  リン脂質 ,  カラムクロマトグラフィー ,  脱保護基 ,  *酵素的合成 ,  触媒 ,  ドッキングシミュレーション ,  改変 ,  糖アルコール

著者キーワード (4件)： ホスファチジルトレオニン ,  ホスホリパーゼD ,  蛋白質工学 ,  トランスホスファチジル化

分類 (3件)： 食用油脂,マーガリン  (FJ09010C) ,  油脂の性質  (YG01020T) ,  酵素の応用関連  (EB09100B)

物質索引 (1件)： イノシトール

タイトルに関連する用語 (3件)： 改変 ,  ホスホリパーゼD ,  酵素的合成