特許
J-GLOBAL ID：201903012312993253
試料中の複数種類の短鎖核酸の検出方法、組み合わせ分析キットおよび分析キット供給管理方法
発明者：
,
出願人/特許権者：
代理人 (1件)：
特許業務法人スズエ国際特許事務所
公報種別：特許公報
出願番号（国際出願番号）：特願2018-505207
特許番号：特許第6577660号
出願日： 2016年03月18日
請求項（抜粋）：
【請求項1】 試料中の複数種類の標的核酸の検出する方法であって、
前記複数の標的核酸は短鎖核酸であり、当該標的核酸間で互いに異なる標的配列をそれぞれ含み、当該標的配列は、5’端側に第1のサブ標的配列を含み、3’端側に第2のサブ標的配列を含み、
前記方法は、
(a)前記複数の標的配列のそれぞれについて、当該標的配列を含む長鎖核酸を得るための長鎖化核酸セット群を準備すること、
ここで、
各長鎖化核酸セットは、第1のサブ長鎖化核酸と第2のサブ長鎖化核酸を含み、
目的とする当該標的配列に対応して、
前記第1のサブ長鎖化核酸は、前記第1のサブ標的配列と同じ配列またはそれに相補的な第1の相補配列を含む第1の標的結合領域を一端に含み、他端側に第1の増幅用領域を含み、
前記第2のサブ長鎖化核酸は、前記第2のサブ標的配列に相補的な第2の相補配列を含む第2の標的結合領域を3’端に含み、および5’端側に第2の増幅用領域を含む、
ここで、前記第1のサブ長鎖化核酸および前記第2のサブ長鎖化核酸の少なくとも一方は、更に検出用領域を含み、前記第1のサブ長鎖化配列が当該検出用領域を含む場合には、当該検出用領域は、前記第1の標的結合領域と前記第1の増幅用領域との間に前記第1の標的結合領域とは重なり合わないように第1の検出用領域として存在し、前記第2のサブ長鎖化配列が当該検出用領域を含む場合には、当該検出用領域は、前記第2の標的結合領域と前記第2の増幅用領域との間に前記第2の標的結合領域とは重なり合わないように第2の検出用領域として存在し、
前記検出用領域は、目的とする当該標的配列に予め対応付けられており、前記複数の標的核酸間で互いに異なる配列を有し、前記長鎖化核酸セットは、第1のサブ長鎖化核酸および第2のサブ長鎖化核酸の少なくとも一方に検出用領域を含み、
(b)前記第1の増幅用領域に結合する第1のプライマーと、前記第2の増幅用領域に結合する第2のプライマーとを少なくとも含み、前記長鎖化核酸セット群から得られた複数の当該長鎖核酸を共通して増幅するユニバーサルLAMPプライマーセットを準備することと、
(c)基体と、前記基体によって提供される第1の反応場に接する面に固定されている複数種類のプローブ群とを含むプローブ固定基体を準備すること、
ここで、前記複数種類のプローブは、
(1)前記複数種類の第1の検出用領域の配列のそれぞれと同じ配列、
(2)前記複数の第1の検出用領域の配列のそれぞれに対する相補配列、
(3)前記複数の第2の検出用領域の配列のそれぞれと同じ配列、
(4)前記複数の第2の検出用領域の配列のそれぞれに対する相補配列
のうち、(1)ないし(4)の配列の少なくとも1つをそれぞれ含み、
(d)当該試料と、前記(a)で準備された前記長鎖化核酸セット群とを第2の反応場に持ち込み、
前記複数種類の標的核酸のそれぞれと、対応する前記第1のサブ長鎖化核酸および対応する前記第2のサブ長鎖化核酸との間でのアニールおよびライゲーション、および/または核酸伸長によって、前記複数の標的核酸のそれぞれについて、前記第1のサブ長鎖化配列と前記第2のサブ長鎖化配列またはその相補配列とを含む長鎖核酸群を得ることと、
(e)前記第1の反応場において、前記長鎖核酸群と前記ユニバーサルLAMPプライマーセットとをLAMP条件下に維持し、それにより増幅産物群を得ることと、
(f)前記第1の反応場において、前記(e)で生じた全ての増幅産物群と前記複数種類のプローブとの間でのハイブリダイゼーションの有無および/または量を検出することと、
(g)前記(f)の結果に基づいて、前記試料中に存在する前記複数の標的核酸を検出することと
を含む方法。
IPC (6件)：
C12Q 1/6844 ( 201 8.01)
, C12Q 1/6837 ( 201 8.01)
, C12M 1/00 ( 200 6.01)
, G01N 33/53 ( 200 6.01)
, G01N 37/00 ( 200 6.01)
, C12N 15/09 ( 200 6.01)
C12Q 1/684 ZNA Z
, C12Q 1/683 Z
, C12M 1/00 A
, G01N 33/53 M
, G01N 37/00 102
, C12N 15/09 200
