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J-GLOBAL ID：202102284081793215   整理番号：21A1238633

部位特異的突然変異はMyxoccussp.V11マルトシルトレハロースヒドロラーゼMTHaseの触媒中心を同定する。【JST・京大機械翻訳】

Identification of Amino Acids Related to Catalytic Function of Myxococcus sp.V11 Maltooligosyltrehalose Trehalohydrolase by Site-Directed Mutagenesis

著者 (7件)： Chen Yunda (江西省農業微生物資源開発与利用工程実験室,江西農業大学 生物科学与工程学院,江西 南昌 330045) ,  Li Xueliang (江西省農業微生物資源開発与利用工程実験室,江西農業大学 生物科学与工程学院,江西 南昌 330045) ,  Wu Yinghan (江西省農業微生物資源開発与利用工程実験室,江西農業大学 生物科学与工程学院,江西 南昌 330045) ,  Zhao Xiaoyan (江西省農業微生物資源開発与利用工程実験室,江西農業大学 生物科学与工程学院,江西 南昌 330045) ,  Wu Xiaoyu (江西省農業微生物資源開発与利用工程実験室,江西農業大学 生物科学与工程学院,江西 南昌 330045) ,  Wang Fei (江西省農業微生物資源開発与利用工程実験室,江西農業大学 生物科学与工程学院,江西 南昌 330045) ,  Chen Jinyin (江西省果蔬保鮮与質量安全創新中心,江西 南昌 330045)
資料名： Jiangxi Nongye Daxue Xuebao  (Jiangxi Nongye Daxue Xuebao)
巻： 43  号： 1  ページ： 190-197  発行年： 2021年 
JST資料番号： C2944A  ISSN： 1000-2286  CODEN： JNXUEV  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： 中国 (CHN)  言語： 中国語 (ZH)

抄録/ポイント： [目的]マルトオリゴ糖ベースのトレハロースヒドロラーゼ(MTHase)は,α-1,1グリコシド結合に隣接したα-1,4グリコシド結合を加水分解し,マルトオリゴ糖とトレハロースを生成し,澱粉を基質として用いてトレハロースを製造する鍵酵素である。菌株Myxoccussp.V11のゲノムからマルトオリゴ糖基トレハロースヒドロラーゼ遺伝子をクローニングし、異種発現させ、アミノ酸配列分析と三次元モデリングを通じて、その可能な触媒中心アミノ酸残基構成を推測した。【方法】MTHaseの3つの活性部位D256,E291,D386を,それぞれD256A,E291AおよびD386Aに変異させた。【結果】系統樹の結果はMyxoccussp.V11産MTHaseと既報のDeinoccusradioduransが産生するマルトオリゴ糖基トレハロースヒドロラーゼ(MaltooligosyltrehaloseTrehalohydrolase)。DR0464の類似度は最も高かったが,49.23%だけであり,既報のアミラーゼとの類似度には大きな差があった。アミノ酸配列アラインメントの結果は,MTHaseが他の由来のマルトオリゴ糖ベースのトレハロースヒドロラーゼと同じ保存配列を持つことを示した。GTFTPEG(113-119)、WGYDG(153-157)、ED(291-292)、GLXVXLDXVXNHXGPXGNY(184-202)、DGXRXDA(251-257)。IQNHDQ(382-387)。結合体活性中心(Asp256-Glu291-Asp386)は保存領域内にあり、その中のAsp256は求核試薬であり、Glu291は酸塩基が触媒するプロトン供与体であり、Asp386はGlu291の安定配座を維持する作用を発揮している。最も高い類似性を持つマルトオリゴ糖ベースのトレハロースヒドロラーゼ(PDBID:2BHU)をテンプレートとして、SWISS-MODEL上で相同モデリングを通じてMTHaseの三次元構造モデルを得た。MTHaseと2BHUとの類似性はわずか49%であるが、いずれも典型的なGH13ファミリーグリコシドヒドロラーゼが共有する(α/β)8バレル様ドメインを有する。三次元構造は,MTHaseが3つのドメインから成ることを示した。触媒ドメインDomainA(Ala95-Asp316、Gln372-Ser512)は典型的な(α/β)8バレル構造を形成し、DomainAの中間に一つの裂口を形成し、活性中心はポケット内に位置する。N末端ドメイン(DomainB)は主にβ-折り畳み構造であり、DomainCもβ-折り畳みから構成され、三連体Asp256-Glu291-Asp386はDomainCに近い位置にある。MTHaseは基質と連結するアミノ酸残基Gly197,Pro198,Gly200,Asn201,Tyr202,Trp210,Asp316,Asp317,His320,Tyr337,Arg366。Asn390は2BHUと一致した。部位特異的突然変異,組換発現および活性アッセイにより,突然変異体D256A,E291AおよびD386Aがアミラーゼ活性を完全に失うことを示した。[結論]MTHaseの活性中心はD256、E291とD386から構成され、基質と結合するアミノ酸部位は異なる基質に対する適応性を決定する。Data from Wanfang. Translated by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 立体配座 ,  加水分解 ,  アミノ酸 ,  アミノ酸配列 ,  アミラーゼ ,  遺伝子 ,  *ヒドロラーゼ ,  活性部位 ,  系統樹 ,  折畳み ,  アミノ酸残基 ,  *部位特異的変異誘発 ,  二糖類 ,  ピラノシド ,  グルコシド
準シソーラス用語： マルトオリゴ糖 ,  ドメイン構造 , 【Automatic Indexing@JST】

分類 (2件)： 酵素一般  (EB09010D) ,  遺伝子の構造と化学  (EC02020U)

物質索引 (1件)： トレハロース

タイトルに関連する用語 (2件)： 部位特異的突然変異 ,  同定