細胞融合と単一分子イメージングによる蛋白質複合体の化学量論的解析【JST・京大機械翻訳】

Singh, A.; Van Slyke, A.; Sirenko, M.; Song, A.; Kammermeier, P.; Zipfel, W.

プレプリント

J-GLOBAL ID：202202204920299325 整理番号：22P0224022

細胞融合と単一分子イメージングによる蛋白質複合体の化学量論的解析【JST・京大機械翻訳】

Stoichiometric Analysis of Protein Complexes by Cell Fusion and Single Molecule Imaging

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発行年： 2020年01月26日プレプリントサーバーでの情報更新日： 2020年01月26日
JST資料番号： O7001B 資料種別：プレプリント
記事区分：プレプリント発行国：アメリカ合衆国 (USA) 言語：英語 (EN)

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超分子蛋白質複合体の組成,化学量論及び相互作用は生物学的機能の重要な決定因子である。分子相互作用を研究し,単一分子レベルでサブユニット化学量論を定量化するいくつかの技術を開発した。しかし,これらは通常,単一分子イメージングに必要な低フルオロフォア濃度,または天然サブユニット相互作用を混乱させる可能性のある複合体の界面活性剤分離の使用を達成するために,人工的に低い発現レベルを必要とする。ここでは,蛋白質複合体が生理的濃度で集合し,その後,単一分子レベル観察のためにin situで希釈される代替アプローチを提示し,一方,それらを近天然細胞環境中に保存する。著者らは,in vivo蛍光相関分光法(FCS),蛋白質複合体化学量論を定量化するための漂白段階計数,および二色単一分子共局在化のような単一分子技術とこのin situ希釈戦略の結合が,これらの単一分子蛍光法を用いて得られたデータの品質を改善することを示した。希釈後の単一蛋白質回収(SPReAD)は,単一分子測定の濃度範囲を細胞領域へ拡張する簡単で多目的な手段であり,一方,潜在的アーチファクトと蛋白質複合体化学量論の摂動を最小にした。SIGNIFICANCE STATEMENTQは,生細胞における蛋白質複合体の構成と化学量論を,それらの機能に関与する機構を理解するために重要である。ここでは,蛋白質複合体が生理的濃度で細胞内に集合する方法を詳細に述べるが,細胞環境内では,単一分子蛍光観察に適したレベルまで希釈する。この技法は,界面活性剤単離法の使用あるいは単一分子観察レベルの達成にしばしば用いられる人工的に低い発現レベルから起こる可能性のあるアーチファクトを避けながら,化学量論および機能的相互作用を決定するために,段階的光漂白定量および蛍光相関分光法のような一般的な単一分子分析技術の使用を可能にする。【JST・京大機械翻訳】

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蛋白質・ペプチド一般

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