抄録/ポイント:
抄録/ポイント
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結晶化可能なGPCRを生成する最も一般的な方法は,アラニン変異誘発と結晶化促進パートナー蛋白質への融合である。本研究の主目的は,結晶化のための受容体安定性と付加的可溶性表面を提供する新しいGPCRツールを作成することであった。この目的のために,両基準を満たすドメイン折畳みとして2本鎖逆平行コイルコイルを選択した。逆平行コイルドコイルの選択を用いて,{ベータ}3アドレナリン受容体の細胞内ループの構造誘導置換を行った。意外なことに,熱安定性コイルコイルを含む2つのGPCR変異体のみが発現した。著者らは,1つのGPCRキメラが洗剤の精製で安定であり,リガンド結合特性を保持し,結晶化できることを示した。しかし,結晶の品質は構造決定に適していなかった。結晶接触を促進するための追加表面を供給するために,T4Lによる逆平行コイルコイルのループに構造ベースアプローチを置換した。発現は構造研究に適していないが,エンジニアリングしたGPCRはコイルドコイル変異体よりさらに安定であることを見出した。本アプローチは,安定なGPCRから利益を得る応用にとって興味深い。【JST・京大機械翻訳】