組換蛋白質発現のための大腸菌株のスケーラブルなスクリーニング【JST・京大機械翻訳】

Morao, L. G.; Manzine, L. R.; Clementino, L. O. D.; Wrenger, C.; Nascimento, A. S.

プレプリント

J-GLOBAL ID：202202211819002474 整理番号：21P0247413

組換蛋白質発現のための大腸菌株のスケーラブルなスクリーニング【JST・京大機械翻訳】

A Scalable Screening of E. coli Strains for Recombinant Protein Expression

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発行年： 2022年05月12日プレプリントサーバーでの情報更新日： 2022年05月12日
JST資料番号： O7001B 資料種別：プレプリント
記事区分：プレプリント発行国：アメリカ合衆国 (USA) 言語：英語 (EN)

構造生物学プロジェクトは,可溶性蛋白質の大規模発現に強く依存し,この目的のために,宿主系として細菌または酵母を用いた異種発現は通常使用される。このシナリオにおいて,最適化すべきパラメータのいくつかは,融合蛋白質の使用,N末端融合/タグの選択,またはC末端融合/タグのような蛋白質構築物に関連するものを含む。(ii)誘導剤および温度発現の濃度と選択,および(iii)原核生物または真核細胞の選択,および菌株の採用を含む宿主系の選択などの発現段階に関連した。蛋白質発現,段階(ii)に関連するいくつかのパラメータの最適化は直接的である。一方,蛋白質構築に関連する最も適切なパラメータの決定は,遺伝子クローニングの新しいサイクルを必要とするが,宿主細胞の最適化は簡単ではない。ここでは,構造生物学パイプラインにおける蛋白質発現のための宿主細胞のスクリーニングのためのスケーラブルなアプローチを評価した。著者らは,蛋白質構築と遺伝子クローニングのための同じ戦略を用いて,可溶性異種蛋白質発現の最良の収率を探す4つの大腸菌株を評価し,それを標準株Rosetta2(DE3)と比較した。液体ハンドリング装置(ロボット)を用いて,大腸菌pT-GroE,Lemo21(DE3),北極Express(DE3)およびRosetta Gami2(DE3)株を可溶性異種蛋白質回収の最大収率のためにスクリーニングした。この実験で用いた遺伝子では,北極Express(DE3)株は可溶性異種蛋白質のより良い収率をもたらした。ホスト細胞/菌株のスクリーニングは,より小さな実験室でも実行可能であり,提案した実験は高スループットアプローチに容易に拡張可能であることを提案した。【JST・京大機械翻訳】

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遺伝子発現 , 微生物の生化学

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