オクトパス神経形成を可視化するための免疫組織化学,クリアリングおよびイメージングによる全マウントRNA多重in situハイブリダイゼーション連鎖反応の最適化【JST・京大機械翻訳】

Elagoz, A. M.; Styfhals, R.; Maccuro, S.; Masin, L.; Moons, L.; Seuntjens, E.

プレプリント

J-GLOBAL ID：202202213894792530 整理番号：22P0316290

オクトパス神経形成を可視化するための免疫組織化学,クリアリングおよびイメージングによる全マウントRNA多重in situハイブリダイゼーション連鎖反応の最適化【JST・京大機械翻訳】

Optimization of Whole Mount RNA multiplexed in situ Hybridization Chain Reaction with Immunohistochemistry, Clearing and Imaging to visualize octopus neurogenesis

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発行年： 2022年02月24日プレプリントサーバーでの情報更新日： 2022年02月24日
JST資料番号： O7001B 資料種別：プレプリント
記事区分：プレプリント発行国：アメリカ合衆国 (USA) 言語：英語 (EN)

遺伝子発現解析は,多くの種の胚発生の間の鍵となる因子の機能を理解するために役立つ。マーカー分析は臓器機能および疾患進行を研究するためのツールとしても使用される。これらの過程は3次元で起こるので,全器官または胚における遺伝子発現の検出を可能にする技術の開発が必須である。ここでは,免疫組織化学(IHC)と組み合わせたin situハイブリダイゼーション鎖反応バージョン3.0(HCR v3.0)の,全体マウントOctopus vulgaris胚におけるフルクトース-グリセロールクリアリングと光シート蛍光顕微鏡(LSFM)イメージングによる,全マウント多重RNAの最適化されたプロトコルを述べた。蛍光in situ mRNA可視化のためのHCR v3.0型プローブ対の設計に適用できるプローブ設計を自動化するためのコードを開発した。概念の証明として,ニューロン(Ov-elav)と神経膠(Ov-apolpp)マーカーを多重HCR v3.0に使用した。神経前駆細胞(Ov-ascl1)と前駆体(Ov-神経D)マーカーを,有糸分裂のマーカーであるリン酸化ヒストンH3の免疫染色と組み合わせた。いくつかの組織除去法を比較した後,フルクトース-グリセロールクリアリングがHCR v3.0の蛍光シグナルの保存に最適であった。全体のマウント卵胚において観察された発現は,パラフィン包埋横断面から集められた以前の発現データと一致した。三次元再構成は,二次元法を用いて発見されなかった付加的空間組織を明らかにした。【JST・京大機械翻訳】

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遺伝学研究法 , 遺伝子発現

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