抄録/ポイント：
抄録/ポイント
文献の概要を数百字程度の日本語でまとめたものです。
部分表示の続きは、JDreamⅢ(有料)でご覧頂けます。
J-GLOBALでは書誌(タイトル、著者名等)登載から半年以上経過後に表示されますが、医療系文献の場合はMyJ-GLOBALでのログインが必要です。
16S rRNA遺伝子アンプリコンDNA配列決定による細菌検出は,現在,広く応用されている技術であるが,試料調製とDNA抽出のための標準化法は,自動化のための精度,再現性,およびスケーラビリティを確実にするのに必要である。牛乳のこれらの方法を開発するために,牛乳中に一般的に見出される細菌種を含む細菌細胞モックコミュニティ(BCMC)を組み立てた。BCMC計数法(コロニー計数または顕微鏡),試料体積(200lから30ml),試料貯蔵条件(PBSまたは25%グリセロールまたは凍結融解サイクルへの曝露),細胞溶解法(ビーズビート,ボルテックス,酵素)およびDNA抽出手順(MagMAX全,MagMAX COREおよびMagMAX Ultra2.0,Proteinase KまたはRNアーゼAの有り無し)の方法に対する変動を調べた;BCMC計数法(コロニー計数または顕微鏡観察),細胞溶解法(ビーズ-ビート,ボルテックス,酵素)およびDNA抽出手順(MagMAX Total,MagMAX COREおよびMagMAX Ultra2.0)。顕微鏡による細胞計数は,BCMC含有量の定量化のためにより正確であることを示した。16S rRNA遺伝子アンプリコンDNA配列決定による再現可能な細菌検出には,少なくとも10mL([≧]10 ̄4細胞)が必要であるが,貯蔵条件の変化はBCMCにわずかな差を引き起こすことを見出した。DNA抽出と精製のために,MagMAX全キットとプロテイナーゼK消化と対になった穏やかな溶解段階(4m/sで10秒間のビーズビートまたは1800rpmでボルテックス)は,BCMCの最も正確な表現を提供した。これらのアプローチは,市販の牛乳試料で同様の結果を提供することを確認した。全体として,細胞溶解法の変動は,乳微生物叢組成に最も大きな変化を与え,したがって,試料タイプのために最適化されるべきである。【JST・京大機械翻訳】
