Methanococcus maripaludisの代謝工学のための効率的なCRISPR/Cas12aベースのゲノム編集ツールボックス【JST・京大機械翻訳】

Bao, J.; de Dios Mateos, E.; Scheller, S.

プレプリント

J-GLOBAL ID：202202214734809068 整理番号：22P0031239

Methanococcus maripaludisの代謝工学のための効率的なCRISPR/Cas12aベースのゲノム編集ツールボックス【JST・京大機械翻訳】

Efficient CRISPR/Cas12a-based genome editing toolbox for metabolic engineering in Methanococcus maripaludis

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発行年： 2022年03月16日プレプリントサーバーでの情報更新日： 2022年03月16日
JST資料番号： O7001B 資料種別：プレプリント
記事区分：プレプリント発行国：アメリカ合衆国 (USA) 言語：英語 (EN)

急速増殖および遺伝的に扱いやすいメタン生成細菌Methanococcus maripaludisは,二酸化炭素および再生可能水素の燃料および付加価値製品へのバイオテクノロジー変換のための有望な宿主生物である。代謝工学によるその製品範囲の拡大は,特に細胞増殖に影響する一次代謝に対するゲノム編集のために,信頼できて効率的な遺伝的ツールを必要とする。ここでは,M.maripaludisに内在的に存在する相同性指向修復機構と組み合わせて,Lachnospiraceae細菌ND2006(LbCas12a)からCas12aを利用することによってゲノム編集ツールボックスを設計した。注目すべきことに,このツールボックスはM.maripaludisの多倍数性にもかかわらず,95%までの成功率で標的遺伝子をノックアウトできる。大型欠失を示す目的で,{β}-グルクロニダーゼ遺伝子により鞭毛オペロン(ca.8.9kbp)を置換した。M.maripaludisの代謝工学とフラックスバランスを促進するために,15の異なるプロモーターの相対強度を,2つの一般的な成長基質,ギ酸塩または二酸化炭素と水素の存在下で定量化した。このCRISPR/LbCas12aツールボックスは,メタン生成細菌におけるゲノム編集のための信頼できて迅速な方法とみなすことができる。【JST・京大機械翻訳】

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遺伝子操作

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