抄録/ポイント：
抄録/ポイント
文献の概要を数百字程度の日本語でまとめたものです。
部分表示の続きは、JDreamⅢ(有料)でご覧頂けます。
J-GLOBALでは書誌(タイトル、著者名等)登載から半年以上経過後に表示されますが、医療系文献の場合はMyJ-GLOBALでのログインが必要です。
数および輝度分析(N&B)は,蛋白質オリゴマ化を定量化する蛍光分光法である。しかし,正確な結果は,蛍光ラベルの非蛍光状態,特に生物学で広く使用されている蛍光蛋白質(FP)の良好な知識に依存する。FPsは,カメラベースのN&Bではなく,共焦点に対して特性化され,それは,より大きな領域にわたって,原理的に速い測定を可能にする。ここでは,蛍光に対する傾向を決定することにより,種々の蛍光蛋白質に対する全内部反射蛍光(TIRF)顕微鏡に実装されたカメラベースのN&Bを較正した。次に,生きたCHO-K1細胞におけるカメラに基づくN&Bを適用して,多くの癌における意味合いを持つ細胞増殖と生存の重要な調節因子である上皮成長因子受容体(EGFR)のオリゴマ化状態を決定した。静止細胞におけるEGFRのオリゴマ化と細胞膜微小環境によるその調節はまだ議論中である。したがって,受容体オリゴマ化に対する膜組織化,細胞骨格構造,リガンド刺激,および種々のEGFRドメインにおける変異を含む内因性因子を含む外因性因子の影響を調べた。著者らの結果は,EGFRオリゴマ化がコレステロールまたはスフィンゴ脂質の除去,またはGM3-EGFR相互作用の破壊によって増加し,ラフト会合を示唆する。しかし,オリゴマ化は細胞骨格により有意な影響を受けなかった。I706/V948残基又はE685/E687/E690残基のどちらかのキナーゼ及び膜近傍ドメインにおける変異は,オリゴマ化の減少をもたらし,EGFR二量化の必要性を示唆した。最後に,EGFRリン酸化は細胞外ドメイン(550-580残基)を含むオリゴマ化依存性である。生化学的研究と組み合わせて,カメラに基づくN&Bは,EGFRのオリゴマ化とリン酸化が,細胞膜の脂質含量と構造,およびキナーゼ,膜,および細胞外ドメインにおける複数の残基を含むいくつかの分子相互作用の結果であることを示した。STATEMENT OF SIGNIFICANCCENmberと輝度(N&B)分析は,蛋白質会合を決定する強力なツールであるが,共焦点顕微鏡ではほとんど行われる。本研究は,全内部反射顕微鏡におけるカメラに基づくN&Bに対する蛍光蛋白質の輝度と蛍光確率を決定し,適切なキャリブレーションにより,異なる蛍光蛋白質が誤差のマージン内でオリゴマ化に同じ答えを与えることを実証した。このカメラベースのアプローチは,約1000m ̄2の領域まで,全電池基底膜にわたってN&B値を測定できた。次いで,N&Bを生化学的アッセイと組み合わせて用いて,細胞シグナル伝達,分裂および生存に重要な原型受容体チロシンキナーゼである表皮成長因子受容体(EGFR)のオリゴマ化および活性化を調べ,様々な癌に関与する。結果は,EGFRのオリゴマ化と活性化が膜構造と細胞内ドメインに細胞外に広がるEGFRの組成と重要なアミノ酸残基との間の相互作用により支配されることを示した。【JST・京大機械翻訳】
