ヒトプロインシュリンの製造方法

Inventor： , , , , , , ,
Applicant, Patent owner：
Agent (1)：高橋健
Gazette classification：公表公報
Application number (International application number)：2000526644
Publication number (International publication number)：2002500013
Application date： Dec. 24, 1998
Publication date： Jan. 08, 2002
Summary：

【要約】本発明は、ヒトプロインシュリンの製造方法に関する。より具体的に、本発明は化学式(I)のヒトプロインシュリンの製造方法に関する。式中、Rが酵素的または化学的に分解できるアミノ酸残基またはペプチドであり、そして、Xが、A-1ないしA-21の領域がインシュリンA鎖で、B-1ないしB-30の領域がインシュリンB鎖である場合、インシュリンA鎖中のA-1のアミノ基とインシュリンB鎖中のB-30のカルボキシル基との結合であって、酵素的または化学的にA鎖またはB鎖から分離することができる結合である。本発明のヒトプロインシュリンの製造方法によると、溶解とスルホン化、濃縮、脱塩および精製の工程を単純化し、再生反応の収率を向上させることから、再現性を確保しながらヒトプロインシュリンを生産することができる。

Claim (excerpt)：

(i)封入体の形でプロインシュリンの融合タンパク質を発現する大腸菌細胞を緩衝溶液に懸濁させ、そして該細胞を溶解することにより、封入体を取得する工程; (ii)工程(i)で得られた該封入体を変性剤を含む緩衝溶液中に懸濁させると同時に、ソジウムサルファイトとソジウムテトラチオネートでスルホン化し、下記化学式(II)のプロインシュリンS-スルホン酸塩の融合タンパク質を取得する工程; (iii )工程(ii)で得られたプロインシュリンS-スルホン酸塩の融合タンパク質を遠心分離して取得した沈澱物をギ酸に溶解し、さらにシアノゲンブロマイドで処理して該融合タンパク質からプロインシュリンS-スルホン酸塩を分離して減圧乾燥する工程; (iv)工程(iii )で得られた乾燥したプロインシュリンS-スルホン酸塩を緩衝溶液に溶解し、該プロインシュリンを陰イオン交換クロマトグラフィーで精製する工程; (v)工程(iv)で得られた該精製プロインシュリンS-スルホン酸塩を第一緩衝溶液に希釈し、さらに窒素ガスを注入することにより酸素を除いて第一混合物を取得し、第一混合物と、2-メルカプトエタノールの添加された第二緩衝溶液とを混合セル中で混合し、貯蔵容器で攪拌することにより、次の化学式(I)のプロインシュリンを含む再生(refolding)反応の混合物を取得する工程;および、 (vi)工程(v)で得られた再生反応の混合物を吸着クロマトグラフィー樹脂に添加し、水性溶出剤で溶出させることにより、再生されたプロインシュリンを取得する工程、を含むヒトプロインシュリンの製造方法であって、【化1】【化2】Rが酵素的または化学的に分解できるアミノ酸残基またはペプチドであり、そして、Xが、A-1ないしA-21の領域がインシュリンA鎖で、B-1ないしB-30の領域がインシュリンB鎖である場合、インシュリンA鎖中のA-1のアミノ基とインシュリンB鎖中のB-30のカルボキシル基との結合であって、酵素的または化学的にA鎖またはB鎖から分離することができる結合である方法。

IPC (5)：

C12N 15/09 , C07K 1/22 , C12N 1/06 , C12P 21/02 , C12R 1:19

FI (5)：

C07K 1/22 , C12N 1/06 , C12P 21/02 E , C12R 1:19 , C12N 15/00 A

F-Term (37)：

4B024AA01 , 4B024BA02 , 4B024DA06 , 4B024GA19 , 4B024HA01 , 4B064AG16 , 4B064CA02 , 4B064CA19 , 4B064CC24 , 4B064CD01 , 4B064CD11 , 4B064CD16 , 4B064CE09 , 4B064CE11 , 4B064DA01 , 4B065AA26X , 4B065AA93Y , 4B065AB01 , 4B065AC14 , 4B065BD01 , 4B065BD15 , 4B065BD22 , 4B065BD25 , 4B065BD35 , 4B065CA24 , 4B065CA44 , 4H045AA10 , 4H045AA20 , 4H045BA41 , 4H045BA50 , 4H045CA40 , 4H045DA37 , 4H045EA27 , 4H045FA50 , 4H045FA58 , 4H045FA74 , 4H045GA23

Patent cited by the Patent：

Cited by examiner (2)

特開昭57-163352
正確に連結されたシスチン橋を有するプロインスリンの取得方法
Gazette classification：公開公報 Application number：特願平5-301480 Applicant：ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト

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