Pat

J-GLOBAL ID：200903062962310665

DNA断片の増幅方法

Inventor： 堀端 章
Applicant, Patent owner： 学校法人近畿大学 ,  独立行政法人科学技術振興機構
Agent (1)： 杉本 勝徳
Gazette classification：公開公報
Application number (International application number)：2006208422
Publication number (International publication number)：2009278865
Application date： Jul. 31, 2006
Publication date： Dec. 03, 2009
Summary：

【課題】高等植物のトランスポゾンディスプレイ法のために、標識PCR産物だけを選択的に増幅でき、実験結果に個人差が少ないDNA断片の増幅方法を提供する。 【解決手段】DNA断片の増幅方法は、高等植物の細胞からゲノムDNAを抽出するDNA抽出工程と、ゲノムDNAを制限酵素によって部分消化してDNA断片とし、このDNA断片にアダプターを付加するアダプター付加工程と、アダプターがライゲーションされたDNA断片を鋳型とし、前記トランスポゾンに特異的なプライマーのみを使用する片側PCR法によって、DNA断片を増幅する第1のPCR工程と、第1のPCR工程によって増幅したDNA断片を鋳型とし、トランスポゾンに特異的な標識プライマー及びアダプターに相補的なプライマーを使用する両側PCR法によって、DNA断片を増幅する第2のPCR工程と、をこの順序で含んでいる。【選択図】図1

Claim (excerpt)：

高等植物のトランスポゾンディスプレイ法に使用するDNA断片の増幅方法であって、 (1)高等植物の細胞からゲノムDNAを抽出するDNA抽出工程と、 (2)ゲノムDNAを制限酵素によって部分消化してDNA断片とし、このDNA断片に前記制限酵素の認識部位と結合可能なアダプターをライゲーションするアダプター付加工程と、 (3)前記アダプターがライゲーションされたDNA断片を鋳型とし、前記トランスポゾンに特異的なプライマーのみを使用する片側PCR法によって、DNA断片を増幅する第1のPCR工程と、 (4)前記第1のPCR工程によって増幅したDNA断片を鋳型とし、前記トランスポゾンに特異的な標識プライマー及び前記アダプターに相補的なプライマーを使用する両側PCR法によって、DNA断片を増幅する第2のPCR工程と、 をこの順序で含むDNA断片の増幅方法。

IPC (2)：

C12N 15/09 ,  C12Q 1/68

FI (2)：

C12N15/00 A ,  C12Q1/68 A

F-Term (28)：

4B024AA07 ,  4B024AA11 ,  4B024AA20 ,  4B024CA01 ,  4B024EA10 ,  4B024FA13 ,  4B024GA06 ,  4B024HA08 ,  4B024HA11 ,  4B063QA01 ,  4B063QA18 ,  4B063QQ04 ,  4B063QQ09 ,  4B063QQ42 ,  4B063QR08 ,  4B063QR32 ,  4B063QR42 ,  4B063QR50 ,  4B063QR55 ,  4B063QR62 ,  4B063QR73 ,  4B063QR78 ,  4B063QS03 ,  4B063QS25 ,  4B063QS28 ,  4B063QS34 ,  4B063QS36 ,  4B063QX01

Patent cited by the Patent：

Cited by applicant (3)

• 特願第2002-369691号公報
  
• 米国特許第6,420,117号公報
  
• 変異検出方法、変異検出プログラム及び記憶媒体
  Gazette classification：公開公報   Application number：特願2005-237438   Applicant：国立大学法人和歌山大学, 学校法人近畿大学, 独立行政法人科学技術振興機構