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J-GLOBAL ID：201903021146737030
標的DNAに変異が導入された植物細胞、及びその製造方法
Inventor：
,
Applicant, Patent owner：
Agent (1)：
特許業務法人セントクレスト国際特許事務所
Gazette classification：特許公報
Application number (International application number)：2015033825
Publication number (International publication number)：2015177788
Patent number：6521669
Application date： Feb. 24, 2015
Publication date： Oct. 08, 2015
Claim (excerpt)：
【請求項1】 下記工程(i)〜(iii)を含む、標的DNAに変異が導入された植物細胞の製造方法
(i)標的DNAと相同な第1のDNA及び第2のDNAと、マーカー遺伝子とを含むDNA構築物であって、下記(a)〜(e)の特徴を有するDNA構築物を、植物細胞に導入する工程、
(a)前記マーカー遺伝子の5’側に第1のヌクレアーゼ認識部位を介して第1の相同DNAが付加されており、
(b)前記マーカー遺伝子の3’側に第2のヌクレアーゼ認識部位を介して第2の相同DNAが付加されており、
(c)第1の相同DNAの3’末端領域と第2の相同DNAの5’末端領域とが、相同な30〜500ヌクレオチドからなるDNA配列(短鎖重複DNA配列)であり、
(d)第1の相同DNA及び第2の相同DNAの少なくとも1のDNAにおいて、前記短鎖重複DNA配列以外の領域に所望の変異が導入されている
(e)第1及び第2のヌクレオチド認識配列が同一のヌクレアーゼに特異的に認識される非対称配列であり、前記DNA構築物において、第1のヌクレオチド認識配列の向きと第2のヌクレオチド認識配列の向きとが逆になっている
(ii)第1及び第2の相同DNAと前記標的DNAとの相同組換えにより、第1及び第2のヌクレアーゼ認識部位に挟まれた前記マーカー遺伝子と前記変異とが当該標的DNAに導入されている植物細胞を、前記マーカー遺伝子の発現を指標として選択する工程、
(iii)工程(ii)にて選択された細胞に、第1及び第2のヌクレアーゼ認識部位を特異的に認識するヌクレアーゼを発現させ、前記マーカー遺伝子、並びに第1及び第2のヌクレアーゼ認識部位を当該標的DNAから除去する工程。
IPC (3)：
C12N 15/09 ( 200 6.01)
, C12N 5/04 ( 200 6.01)
, A01H 5/00 ( 201 8.01)
C12N 15/09 ZNA Z
, C12N 5/04
, A01H 5/00 A
Cited by examiner (6)
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