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J-GLOBAL ID：202403009815220218

抗体薬物複合体の製造方法及びそれに用いる酵素

Inventor： 金森 聡 ,  全 賢基 ,  成見 英樹 ,  大原 啓一郎 ,  伊藤 創平 ,  中野 祥吾 ,  川▲崎▼ 真由
Applicant, Patent owner： 日本マイクロバイオファーマ株式会社 ,  静岡県公立大学法人
Agent (1)： 弁理士法人特許事務所サイクス
Gazette classification：公開公報
Application number (International application number)：2022160789
Publication number (International publication number)：2024054523
Application date： Oct. 05, 2022
Publication date： Apr. 17, 2024
Summary：

【課題】ペイロードで修飾したヒト型糖鎖を、糖鎖均一化抗体に効率よく複合化しうる酵素、及び該酵素による抗体薬物複合体の製造方法を提供する。 【解決手段】糖鎖均一化抗体と還元末端がオキサゾリン化された糖鎖にリンカーを介して薬物が結合した糖鎖結合薬物とを、エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼ変異酵素によりコンジュゲーションする工程を含み、本工程において、前記変異酵素は(1)特定のアミノ酸配列において、125番目がD以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなる;(2)(1)に記載の酵素から、1若しくは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び/又は付加し、ただし125番目相当がD以外のアミノ酸であり、かつコンジュゲーション活性を有する;(3)(1)に記載の酵素と少なくとも90%の同一性を有し、ただし125番目相当がD以外のアミノ酸であり、かつコンジュゲーション活性を有する。 【選択図】なし

Claim (excerpt)：

下記の工程を含む、抗体薬物複合体の製造方法: 糖鎖均一化抗体と糖鎖結合薬物とを、エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼ変異酵素によりコンジュゲーションする工程であり、糖鎖結合薬物が、還元末端がオキサゾリン化された糖鎖にリンカーを介して薬物が結合したものである、工程において、上記エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼ変異酵素が、下記のいずれか一のタンパク質である工程: (1)配列番号1のアミノ酸配列、又は配列番号1のアミノ酸配列において、125番目がD以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質; (2)(1)に記載のタンパク質のアミノ酸配列において、1若しくは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び/又は付加したアミノ酸配列からなり、ただし125番目相当がD以外のアミノ酸であり、かつコンジュゲーション活性を有する、タンパク質; (3)(1)に記載のタンパク質のアミノ酸配列と少なくとも90%の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ただし125番目相当がD以外のアミノ酸であり、かつコンジュゲーション活性を有する、タンパク質; (4)配列番号8のアミノ酸配列において、22番目がP以外のアミノ酸及び/又は224番目がM以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質; (5)(4)に記載のタンパク質のアミノ酸配列において、1若しくは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び/又は付加したアミノ酸配列からなり、ただし22番目相当がP以外のアミノ酸及び/又は224番目相当がM以外のアミノ酸であり、かつコンジュゲーション活性を有する、タンパク質; (6)(4)に記載のタンパク質のアミノ酸配列と少なくとも90%の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ただし22番目相当がP以外のアミノ酸及び/又は224番目相当がM以外のアミノ酸であり、かつコンジュゲーション活性を有する、タンパク質; (7)配列番号15のアミノ酸配列、又は配列番号15のアミノ酸配列において、233番目がD以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質; (8)(7)に記載のタンパク質のアミノ酸配列において、1若しくは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び/又は付加したアミノ酸配列からなり、ただし233番目相当がD以外のアミノ酸であり、かつコンジュゲーション活性を有する、タンパク質; (9)(7)に記載のタンパク質のアミノ酸配列と少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ただし233番目相当がD以外のアミノ酸であり、かつコンジュゲーション活性を有する、タンパク質; (10)配列番号29のアミノ酸配列、又は配列番号29のアミノ酸配列において、233番目がD以外のアミノ酸であるアミノ酸配列からなるタンパク質; (11)(10)に記載のタンパク質のアミノ酸配列において、1若しくは複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び/又は付加したアミノ酸配列からなり、ただし233番目相当がD以外のアミノ酸であり、かつコンジュゲーション活性を有する、タンパク質; (12)(10)に記載のタンパク質のアミノ酸配列と少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列からなり、ただし233番目相当がD以外のアミノ酸であり、かつコンジュゲーション活性を有する、タンパク質。

IPC (2)：

C07K 16/00 ,  C12N 9/24

FI (2)：

C07K16/00 ,  C12N9/24

F-Term (16)：

4B050CC04 ,  4B050DD02 ,  4B050FF01 ,  4B050FF02 ,  4B050FF03E ,  4B050FF05E ,  4B050LL01 ,  4B050LL05 ,  4H045AA11 ,  4H045AA20 ,  4H045BA72 ,  4H045CA40 ,  4H045DA76 ,  4H045EA20 ,  4H045FA74 ,  4H045GA26

Patent cited by the Patent：

Cited by applicant (5)

• WO2013/120066A1
  
• 新規EndoS変異酵素
  Gazette classification：再公表公報   Application number：JP2016070921   Applicant：第一三共株式会社
• WO2017/124084A1
  
• US2012/0226024A1
  
• WO2020/006176A1