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J-GLOBAL ID：200902282343798137   整理番号：08A1238584

Ruminococcus albusのセロビオース2-エピメラーゼの酵素特性及び酵素による稀な少糖類の合成

Enzymatic properties of cellobiose 2-epimerase from Ruminococcus albus and the synthesis of rare oligosaccharides by the enzyme

著者 (10件)： ITO Shigeaki (Hokkaido Univ., Sapporo, JPN) ,  TAGUCHI Hidenori (Hokkaido Univ., Sapporo, JPN) ,  HAMADA Shigeki (Hokkaido Univ., Sapporo, JPN) ,  KAWAUCHI Shinpei (Hokkaido Univ., Sapporo, JPN) ,  ITO Hiroyuki (Hokkaido Univ., Sapporo, JPN) ,  SENOURA Takeshi (Hokkaido Univ., Sapporo, JPN) ,  WATANABE Jun (Hokkaido Univ., Sapporo, JPN) ,  NISHIMUKAI Megumi (Hokkaido Univ., Sapporo, JPN) ,  ITO Susumu (Hokkaido Univ., Sapporo, JPN) ,  MATSUI Hirokazu (Hokkaido Univ., Sapporo, JPN)
資料名： Applied Microbiology and Biotechnology  (Applied Microbiology and Biotechnology)
巻： 79  号： 3  ページ： 433-441  発行年： 2008年06月 
JST資料番号： H0764A  ISSN： 0175-7598  CODEN： EJABDD  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： ドイツ (DEU)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： R.albus NE1のセロビオース2-エピメラーゼ(CE)遺伝子及びアフィニティー標識ヒスチジンオリゴペプチド遺伝子を組み込んだプラスミドpCE23aを作製し,大腸菌を用いて組換CEの発現及び特性を調べた。pCE23aベクターの挿入で形質転換した大腸菌細胞の培養にてIPTG添加により発現を誘導し,菌体内蓄積組換CEをNi-NTAアフィニティークロマトグラフィーで精製した。均質的に88%の高収率で精製できた組換酵素は分子量がSDS-PAGE及びゲルろ過で測定して各々43.1及び44.0kDaであった。最適活性がおよそ30°C及びpH7.5を示した組換酵素の活性を各種金属イオン,N-ブロモスクシンイミド,ヨード酢酸及びPCMBが阻害した。セロ少糖類に加えて組換酵素は乳糖を効率的に2-エピマー化して4-O-β-ガラクトピラノシル-D-マンノース(エピラクトース)を生成したが,この反応で稀な少糖類が牛乳で生じていた。乳糖及びセロビオースに対するK_m,並びにk_cat/K_m値は各々33及び13.8mM,並びに1.6及び4.6/秒・mMであった。なお,N-アセチル-D-グルコサミン,ウリジン5′-2リン酸-グルコース,D-グルコース6-リン酸,マルトース,ソホロース,ラミナリビオース及びゲンチオビオースは組換酵素の基質としては不活性であった。また,エピラクトースがラット腸管酵素に耐性であり,ヒト成人ビフィドバクテリアで利用され,Caco-2細胞での密着結合透過性刺激作用のあることを証明した。以上の結果から,この稀な二糖,エピラクトースが前生物的物質として使用される見込みのあることを示唆した。

シソーラス用語： *エピメラーゼ ,  アフィニティー標識 ,  プラスミド ,  ベクター ,  大腸菌 ,  トランスフェクション ,  形質転換 ,  遺伝子発現 ,  組換タンパク質 ,  細胞培養 ,  SDS-PAGE ,  ゲル浸透クロマトグラフィー ,  酵素活性度 ,  最適条件 ,  金属イオン ,  酵素阻害剤 ,  エピマー化 ,  Michaelis定数 ,  安定性 ,  ラット ,  ヒト ,  成人 ,  Caco2細胞 ,  膜透過 ,  ガラクトシド ,  チオ糖 ,  ピラノシド ,  有機硫黄化合物 ,  脂肪族カルボン酸 ,  ハロゲノアミン ,  酸イミド ,  ジカルボン酸 ,  ヘキソース ,  アルドース ,  二糖類 ,  グルコシド ,  脂肪族ヨウ素化合物 ,  ビフィズス菌 ,  Ruminococcus albus ,  *セロビオース2-エピメラーゼ ,  菌体内蓄積 ,  炭水化物エピメラーゼ ,  ペプトコッカス科 ,  微生物 ,  分子遺伝現象 ,  ネズミ亜目 ,  放線菌目 ,  放線菌科 ,  細菌
準シソーラス用語： Peptococcaceae ,  Bifidobacterium ,  Ni-NTAアフィニティークロマトグラフィー ,  pCE23aベクター ,  ゲル濾過 ,  腸管内安定性 ,  密着結合透過性

分類 (3件)： 酵素生理  (EG03052C) ,  遺伝子発現  (EC02040Q) ,  酵素の応用関連  (EB09100B)

物質索引 (7件)： IPTG ,  N-ブロモスクシンイミド ,  PCMB ,  エピラクトース ,  セロビオース ,  ヨード酢酸 ,  乳糖

タイトルに関連する用語 (4件)： Ruminococcus ,  セロビオース2-エピメラーゼ ,  酵素 ,  少糖類