1α,25-ジヒドロキシビタミンDの製造方法

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出願人/特許権者：
代理人 (1件)：特許業務法人特許事務所サイクス
公報種別：公開公報
出願番号（国際出願番号）：特願2008-150935
公開番号（公開出願番号）：特開2009-291171
出願日： 2008年06月09日
公開日（公表日）： 2009年12月17日
要約：

【課題】従来の酵素と比べて、ビタミンDを効率良く1α,25-ジヒドロキシビタミンDに変換し得る酵素を発現する形質転換体を用いて、該化合物を効率良く製造する方法を提供する。【解決手段】特定のアミノ酸配列を有し、かつ25位水酸化活性と、高度な1α位水酸化活性を持つ、ビタミンD水酸化酵素を発現する、大腸菌・放線菌等の形質転換体を、ビタミンDの存在下で培養する、1α,25-ジヒドロキシビタミンDの製造方法。該酵素は、0.2μMビタミンD水酸化酵素の存在下で、10μMビタミンDと1mM NADPHとを30°C、20分間反応させた場合の1α,25-ジヒドロキシビタミンDへの変換率0.10%以上を示す。【選択図】なし

請求項（抜粋）：

下記(a)〜(c)のいずれか1種のアミノ酸配列を有し、かつ下記(d)の活性を有するビタミンD水酸化酵素を発現する形質転換体を、ビタミンDの存在下で培養して、1α,25-ジヒドロキシビタミンDを得ることを特徴とする、1α,25-ジヒドロキシビタミンDの製造方法。 (a)配列表の配列番号1に記載のアミノ酸配列において、 73位のアルギニンがバリン、ロイシン又はイソロイシンに、及び84位のアルギニンがアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、グリシン、システイン、グルタミン、アスパラギン、セリン、トレオニン、チロシン、アスパラギン酸又はグルタミン酸に置換された、改変アミノ酸配列 (b)前記改変アミノ酸配列において、前記73位のアルギニン及び84位のアルギニンの置換の他さらに、1から9個のアミノ酸の欠失、置換、逆位、付加及び挿入からなる群から選ばれる少なくとも1種の修飾を有するアミノ酸配列 (c)前記改変アミノ酸配列と70%以上の相同性を有する、前記73位のアルギニン及び84位のアルギニンの置換を含むアミノ酸配列 (d)0.2μM ビタミンD水酸化酵素の存在下で、10μM ビタミンDと1mM NADPHとを30°C、20分間反応させた場合の1α,25-ジヒドロキシビタミンDへの変換率は0.10%以上である

IPC (1件)：

C12P 33/06

FI (1件)：

C12P33/06

Fターム (31件)：

4B024AA01 , 4B024BA08 , 4B024CA02 , 4B024DA05 , 4B024DA06 , 4B024DA08 , 4B024EA04 , 4B024HA01 , 4B050CC04 , 4B050DD02 , 4B050LL01 , 4B064AC13 , 4B064AC14 , 4B064AG01 , 4B064CA02 , 4B064CA03 , 4B064CA19 , 4B064CA21 , 4B064CB12 , 4B064CC24 , 4B064CD06 , 4B064CD16 , 4B064DA01 , 4B065AA26X , 4B065AA50X , 4B065AB01 , 4B065AC14 , 4B065BD27 , 4B065CA05 , 4B065CA27 , 4B065CA44

引用特許：

出願人引用 (1件)

特許出願公告平4-64678号公報

引用文献：

審査官引用 (6件)

日本農芸化学会大会講演要旨, 2008.03, Vol.2008, p.114
生化学, 2007, p.1P-0184
ビタミン, 2007, Vol.81, No.4, p.152

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