Aドメイン/M1′リンカーの延長とフッ化ベリリウム結合により形成されCa<sup>2+</sup>を結合したCa<sup>2+</sup>-ATPアーゼのADP非感受性ホスホ酵素の安定構造アナログ

DAIHO Takashi; DANKO Stefania; YAMASAKI Kazuo; SUZUKI Hiroshi

文献

J-GLOBAL ID：201002220762032875 整理番号：10A0900887

Aドメイン/M1′リンカーの延長とフッ化ベリリウム結合により形成されCa²⁺を結合したCa²⁺-ATPアーゼのADP非感受性ホスホ酵素の安定構造アナログ

Stable Structural Analog of Ca²⁺-ATPase ADP-insensitive Phosphoenzyme with Occluded Ca²⁺ Formed by Elongation of A-domain/M1′-linker and Beryllium Fluoride Binding

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資料名：
巻： 285 号： 32 ページ： 24538-24547 発行年： 2010年08月06日
JST資料番号： E0038A ISSN： 0021-9258 CODEN： JBCHA3 資料種別：逐次刊行物 (A)
記事区分：原著論文発行国：アメリカ合衆国 (USA) 言語：英語 (EN)

筋小胞体のCa²⁺-ATPアーゼにおいて,E1PCa₂→E2PCa₂→E2P+2Ca²⁺の反応機構を検討するため,輸送部位で2つのCa²⁺を結合するADP非感受性リン酸化酵素中間体(E2PCa₂)の安定なアナログを開発した。この安定化をするために,AドメインとM1ドメイン間のGlu40-Ser48ループを延長し,さらにフッ化ベリリウム(BeF_x)をCa²⁺-ATPアーゼ(E1Ca₂)のリン酸化部位に結合した。それとは別に,このリンカー伸長変異のE2P基底状態アナログの腔側にCa²⁺を結合させて,E2Ca₂・BeF₃^-複合体を形成させた。複合体の形成には触媒性Mg²⁺部位への二価カチオンの結合が必要だった。リン酸化産物であるE1PCa₂とE2P基底状態が可逆的な異性化時にE2PCa₂の遷移状態を形成できた。したがって,異性化と腔側でのCa²⁺放出は触媒部位でのリン酸化と厳密に共役し,このときGlu40-Ser48リンカーとMg²⁺が構造的に重要な役割をすることがわかった。

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酵素生理

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Aドメイン/M1′リンカーの延長とフッ化ベリリウム結合により形成されCa2+を結合したCa2+-ATPアーゼのADP非感受性ホスホ酵素の安定構造アナログ

Aドメイン/M1′リンカーの延長とフッ化ベリリウム結合により形成されCa²⁺を結合したCa²⁺-ATPアーゼのADP非感受性ホスホ酵素の安定構造アナログ