特許
J-GLOBAL ID:201503052780030200
マルチプレックス免疫スクリーニングアッセイ
発明者:
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出願人/特許権者:
代理人 (4件):
村山 靖彦
, 志賀 正武
, 渡邊 隆
, 実広 信哉
公報種別:公表公報
出願番号(国際出願番号):特願2014-545306
公開番号(公開出願番号):特表2015-500989
出願日: 2012年12月10日
公開日(公表日): 2015年01月08日
要約:
本発明は、病原体の早期検出、病原因子の的確な同定および疾患サーベイランスの改善のためのキットおよびアッセイ方法を提供する。より具体的には、本発明は、感染した患者の生体液における広範な感染性病原体に対する抗体の迅速な同時検出をもたらすイムノアッセイを開示する。このイムノアッセイは、AGT基質で先にコーティングされた同定可能な固体支持体(例えば、蛍光マイクロスフェア)における、AGT酵素およびウイルス抗原を含む融合タンパク質の共有結合および志向性カップリングに関与する。このカップリングは、その基質におけるAGT酵素の不可逆的反応により媒介される。このようにして得られた抗原カップリングされたマイクロスフェアは、標準的なアミンカップリング手順により作製された抗原カップリングされたマイクロスフェアと比較して、特異的抗体捕捉の増強を示す。古典的ELISAまたは放射性免疫沈降アッセイと比較して、本発明の方法は、マルチプレックス化し、生体試料の量を最小化し、標的抗体に対し増強された感度および特異性を有する能力を所有する。
請求項(抜粋):
対象由来の生体試料に存在する少なくとも2種の異なる標的抗体を検出するためのin vitroアッセイ方法であって、
(a) - 第1の標的抗体により認識される第1のエピトープを含むポリペプチドと、
- O6-アルキルグアニン-DNAアルキルトランスフェラーゼ活性を有するAGTポリペプチドと
を含む第1の融合タンパク質を用意するステップと、
(b)前記第1の融合タンパク質を、前記AGTポリペプチドの基質と共有結合によりカップリングされた第1の固体支持体と接触させるステップと、
(c)第1の標的抗体により認識される第1のエピトープと共有結合によりカップリングされた第1の固体支持体を得るステップと、
(d) - 第2の標的抗体により認識されるが、前記第1の標的抗体により認識されない第2のエピトープを含むポリペプチドと、
- O6-アルキルグアニン-DNAアルキルトランスフェラーゼ活性を有するAGTポリペプチドと
を含む第2の融合タンパク質を用意するステップと、
(e)前記第2の融合タンパク質を、前記AGTポリペプチドの基質と共有結合によりカップリングされた第2の固体支持体と接触させるステップと、
(f)第2の標的抗体により認識されるが、前記第1の標的抗体により認識されない第2のエピトープと共有結合によりカップリングされた第2の固体支持体を得るステップであって、
前記第1および第2の固体支持体が、互いに特異的に同定され得るステップと、
(g)前記生体試料を、ステップ(c)および(f)において得られた第1および第2の固体支持体と接触させるステップと、
(h)前記少なくとも2種の標的抗体の存在を検出するステップと
を含む方法。
IPC (13件):
G01N 33/543
, G01N 33/53
, G01N 33/553
, G01N 33/544
, G01N 33/545
, G01N 33/569
, C12N 11/06
, C12N 15/09
, C12N 5/10
, C12N 9/10
, C07K 14/08
, C07K 19/00
, C07K 17/00
FI (15件):
G01N33/543 545S
, G01N33/53 N
, G01N33/543 545D
, G01N33/553
, G01N33/544 B
, G01N33/545 A
, G01N33/569
, G01N33/569 L
, C12N11/06
, C12N15/00 A
, C12N5/00 102
, C12N9/10
, C07K14/08
, C07K19/00
, C07K17/00
Fターム (35件):
4B024AA11
, 4B024BA10
, 4B024BA32
, 4B024DA02
, 4B024EA04
, 4B024FA02
, 4B024FA10
, 4B033NA25
, 4B033NB62
, 4B033NC05
, 4B033ND06
, 4B050CC03
, 4B050GG10
, 4B050JJ10
, 4B050LL03
, 4B065AA90X
, 4B065AA95Y
, 4B065AB01
, 4B065AC14
, 4B065BA02
, 4B065CA24
, 4B065CA29
, 4B065CA46
, 4H045AA11
, 4H045AA20
, 4H045AA30
, 4H045BA10
, 4H045BA41
, 4H045BA60
, 4H045CA01
, 4H045DA75
, 4H045DA89
, 4H045EA50
, 4H045FA74
, 4H045FA83
引用特許:
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