分割ルシフェラーゼに基づく「ミックスアンドレッド」アッセイのための実験的および解析的フレームワーク【JST・京大機械翻訳】

McArthur, N.; Cruz-Teran, C.; Thatavarty, A.; Reeves, G. T.; Rao, B. M.

プレプリント

J-GLOBAL ID：202202207935518642 整理番号：22P0315215

分割ルシフェラーゼに基づく「ミックスアンドレッド」アッセイのための実験的および解析的フレームワーク【JST・京大機械翻訳】

Experimental and analytical framework for ''mix-and-read'' assays based on split luciferase

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発行年： 2022年02月15日プレプリントサーバーでの情報更新日： 2022年02月15日
JST資料番号： O7001B 資料種別：プレプリント
記事区分：プレプリント発行国：アメリカ合衆国 (USA) 言語：英語 (EN)

ポイントオブケア検出のような応用における広く使用された酵素結合イムノソルベントアッセイ(ELISA)を含む免疫検出アッセイの使用は,蛋白質固定化と多重結合と洗浄段階の必要性によってしばしば制限される。ここでは,溶液中の分析物の高感度検出と定量を可能にするスプリットルシフェラーゼに基づく簡単でモジュール型”mix-and-read”酵素相補性アッセイの開発のための実験的および分析的枠組みについて述べた。このアッセイにおいて,標的検体上の非重複エピトープを標的とする2つの工学蛋白質結合体を,バイオセンサプローブを作成するためにルシフェラーゼの非活性フラグメントに各々融合した。2つのモデル標的,リゾチームとSso6904への結合蛋白質を酵母表面ディスプレイを用いてSso7d変異体のコンビナトリアルライブラリーから分離した。検体の存在下で,プローブは近接し,ルシフェラーゼの酵素活性を再構成し,化学発光による分析物の低ピコモル濃度の検出を可能にした。続いて,標的に対する結合蛋白質の結合親和性,用いたプローブの濃度のようなアッセイパラメータ,及びアッセイ性能(標的が定量できる検出限界及び濃度範囲の範囲)に関連する平衡結合モデルを構築した。全体として,著者らの実験的および分析的枠組みは,種々の標的の検出および定量のためのスプリットルシフェラーゼアッセイの開発に対する基礎を提供する。【JST・京大機械翻訳】

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バイオアッセイ

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