抄録/ポイント：
抄録/ポイント
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細胞内代謝物濃度を知ることは,バイオテクノロジーと同様に基本的な代謝研究にとって重要である。定量的メタボロミクスワークフロー,すなわち,サンプリング,消光および抽出における第一段階は,不偏な定量的データを得るための鍵である。適格な消光と抽出法は,内因性代謝物レベルを保存するため,in vivo生化学反応活性を急速に終了するだけでなく,細胞から全ての代謝物を完全に抽出する必要がある。最近,2つの異なる濾過ベースのサンプリング,消光,および抽出法が提案され,定量的酵母メタボロミクスのために使用された。1つの方法は,濾過段階後にメタノール-アセトニトリル-水溶液を用いて1段階に消光と抽出を統合し,一方,他の-より通常の方法は,冷メタノールと沸騰エタノールによる抽出物で急冷する。本研究では,これらの2つの方法が酵母による定量的メタボローム分析に等しく適しているかどうかを試験した。分析法としてGC-MSとLC-MSによる同位体希釈質量分析(IDMS)を用いて,細胞体積の正確な定量と組み合わせて,異なる生理学を有する2つのS.cerevisiae株におけるアミノ酸,有機酸,リン酸化糖,およびヌクレオチドをカバーする63の細胞内代謝物の絶対濃度を決定した。2つの方法で生成された試料からのデータの解析により,両方法は,アミノ酸と有機酸に対して本質的に同一濃度をもたらすが,低温溶媒抽出は,おそらくこの方法のより低い消光または抽出効率のため,特にリン酸化糖とヌクレオチドに対して有意に低い濃度をもたらすことを見出した。著者らの結果は,沸騰-エタノール-抽出と組み合わせたメタノール-消光が,酵母細胞から広範囲の異なる代謝産物を定量することを目指したとき,より正確なアプローチであることを示した。両共通代謝産物抽出法間で観察された有意な不一致は,酵母で見られるような剛直細胞壁を持つ微生物と作用するとき,特に定量的研究に対する方法最適化の重要性を示した。【JST・京大機械翻訳】
