PCRにより増幅させた伸長DNA鎖の検出方法、および、標的配列の測定方法

Inventor： , , ,
Applicant, Patent owner： ,
Agent (2)：辻丸光一郎 , 中山ゆみ
Gazette classification：公開公報
Application number (International application number)：2006346582
Publication number (International publication number)：2008154498
Application date： Dec. 22, 2006
Publication date： Jul. 10, 2008
Summary：

【課題】定量性に優れ且つ同一反応液中の複数の増幅産物を各々検出可能な、新たなPCR増幅産物の検出方法を提供する。【解決手段】標的配列を鋳型とし、これにプライマーと標識化プローブとをアニーリングさせる。DNAポリメラーゼのポリメラーゼ活性により、標的配列にアニーリングしたプライマーから標的配列に相補的なDNA鎖を5’→3’方向に伸長させ、且つ、DNAポリメラーゼの5’→3’エキソヌクレアーゼ活性により、標的配列にアニーリングした標識化プローブを分解し、標識化物質が結合した断片を遊離させる。この伸長反応(それに伴う分解反応)を繰り返し、標識配列に相補的な伸長DNA鎖を増幅する。この反応液について質量分析を行い、遊離した標識化物質結合断片の有無や量を検出して、標識配列に相補的な伸長DNA鎖の有無または増幅量を検出する。【選択図】図1

Claim (excerpt)：

PCRによって増幅した、標的配列に相補的な伸長DNA鎖を検出する方法であって、下記(A)〜(F)工程を含むことを特徴とする伸長DNA鎖の検出方法。 (A) 標的配列、ポリメラーゼ活性および5’→3’エキソヌクレアーゼ活性を有するDNAポリメラーゼ、プライマー、ならびに、オリゴヌクレオチドプローブに標識化物質が結合した標識化プローブを含む反応液を準備する工程 (B) 前記標的配列を鋳型として、これに前記プライマーおよび前記標識化プローブをアニーリングさせる工程 (C) DNAポリメラーゼのポリメラーゼ活性によって、前記標的配列にアニーリングしたプライマーから前記標的配列に相補的なDNA鎖を5’→3’方向に向かって伸長させ、且つ、前記DNAポリメラーゼの5’→3’エキソヌクレアーゼ活性によって、前記標的配列にアニーリングした標識化プローブを分解して、前記標識化物質が結合した断片を遊離させる工程 (D) 前記(C)工程で生成した、前記標的配列とそれに相補的な伸長DNA鎖とからなる二本鎖を解離し、両者を鋳型として、前記プライマーおよび前記標識化プローブをアニーリングさせる工程 (E) 前記工程(C)および工程(D)を繰り返し行うことによって、前記標識配列に相補的な伸長DNA鎖を増幅する工程 (F) 前記反応液について質量分析を行い、前記(C)工程において遊離する前記標識化物質が結合した断片の有無または量を検出することによって、前記標識配列に相補的な伸長DNA鎖の有無または増幅量を検出する工程

IPC (6)：

C12Q 1/68 , C12N 15/09 , C12Q 1/48 , G01N 30/72 , G01N 30/88 , G01N 27/62

FI (7)：

C12Q1/68 A , C12N15/00 A , C12Q1/48 Z , G01N30/72 C , G01N30/88 D , G01N27/62 V , G01N27/62 X

F-Term (47)：

2G041CA01 , 2G041DA03 , 2G041DA04 , 2G041DA05 , 2G041DA09 , 2G041DA13 , 2G041DA16 , 2G041DA18 , 2G041EA04 , 2G041FA11 , 2G041GA02 , 2G041GA03 , 2G041GA05 , 2G041GA06 , 2G041GA08 , 2G041GA12 , 2G041HA01 , 2G041JA04 , 2G041LA07 , 4B024AA11 , 4B024AA20 , 4B024CA01 , 4B024CA04 , 4B024CA09 , 4B024CA11 , 4B024CA12 , 4B024CA20 , 4B024HA08 , 4B024HA11 , 4B024HA13 , 4B024HA14 , 4B024HA20 , 4B063QA01 , 4B063QQ42 , 4B063QQ52 , 4B063QR08 , 4B063QR32 , 4B063QR35 , 4B063QR38 , 4B063QR42 , 4B063QR56 , 4B063QR62 , 4B063QS12 , 4B063QS17 , 4B063QS25 , 4B063QS39 , 4B063QX10

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