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J-GLOBAL ID：201802250846681055   整理番号：18A0966759

乳酸菌における対選択性シームレス変異誘発系の開発【JST・京大機械翻訳】

Development of a counterselectable seamless mutagenesis system in lactic acid bacteria

著者 (4件)： Xin Yongping (State Key Laboratory of Microbial Technology, Shandong University, Jinan, People’s Republic of China) ,  Guo Tingting (State Key Laboratory of Microbial Technology, Shandong University, Jinan, People’s Republic of China) ,  Mu Yingli (State Key Laboratory of Microbial Technology, Shandong University, Jinan, People’s Republic of China) ,  Kong Jian (State Key Laboratory of Microbial Technology, Shandong University, Jinan, People’s Republic of China)
資料名： Microbial Cell Factories (Web)  (Microbial Cell Factories (Web))
巻： 16  号： 1  ページ： 116  発行年： 2017年 
JST資料番号： U7049A  ISSN： 1475-2859  資料種別： 逐次刊行物 (A)
記事区分： 原著論文  発行国： イギリス (GBR)  言語： 英語 (EN)

抄録/ポイント： 【背景】乳酸菌(LAB)は,高価値代謝産物の生産のための細胞工場として作用するために,より多くの注意を受けている。しかしながら,これらの株を遺伝的に修飾するための分子ツールは,主にベクターに基づく二重交差戦略であり,それは面倒で非効率的である。この問題に取り組むために,いくつかの対抗可能なマーカーが開発されているが,それらのほとんどは,前処理なしで野生型宿主細胞に使用されることができなかった。【結果】フェニルアラニルtRNAシンテターゼαサブユニットをコードするpheS遺伝子をLactococcus lactis NZ9000ゲノムにおいて同定した。Lc.lactis NZ9000 L-乳酸デヒドロゲナーゼプロモーター(P_ldh)の制御下での突然変異体pheS遺伝子(pheS*)をプラスミドから発現させたとき,A312G置換により得られたPHE*はフェニルアラニン類似体p-クロロフェニルアラニン(p-Cl-Phe)に敏感な細胞を与えた。この結果は,pheS*がLc.lactisにおける対抗可能なマーカーとして使用されるのに適していることを示唆した。しかしながら,染色体コピーからのpheS*の発現レベルは,p-Cl-Phe感受性を付与するにはあまりに低かった。そこで,pheS*の発現レベルを強化するために,カスケードプロモーターの戦略を試みた。5つのタンデム反復プロモーターP_ldhを有するカセット5Pldh-pheS*は,15mM p-Cl-Pheに対する感受性をもたらした。続いて,5Pldh-pheS*カセットを持つ温度感受性プラスミドpG+host9に基づく対向選択性シームレス変異誘発系PHE*/pG+host9をLc.lactisにおいて開発した。著者らはまた,Lactobacillus casei BL23における対選択可能なマーカーとしてpheS*を適用する可能性を示した。結論:大腸菌において報告されているように,対選択可能なマーカーとしてのpheS*は,L.caseiだけでなくLc.lactisにおける標的遺伝子(s)欠失において機能的であることが示されている。さらに,効率と時間節約の対抗可能なシームレス変異誘発システムPHE*/pG+host9は,前処理なしで野生型宿主細胞に使用できた。Copyright 2018 The Author(s). All rights reserved. Translated from English into Japanese by JST.【JST・京大機械翻訳】

シソーラス用語： 大腸菌 ,  代謝産物 ,  野生型 ,  ゲノム ,  プロモーター領域 ,  プラスミド ,  ベクター ,  *乳酸菌 ,  遺伝 ,  乳酸連鎖球菌 ,  *変異誘発 ,  前処理
準シソーラス用語： 選択可能マーカー ,  宿主細胞 ,  *シームレス , 【Automatic Indexing@JST】

著者キーワード (5件)： 乳酸菌 ,  温度感受性プラスミド ,  シームレス変異誘発 ,  対選択可能なマーカー ,  PHES

分類 (4件)： 微生物の生化学  (EG03020N) ,  チーズ  (FJ12025C) ,  微生物形態学・分類学  (EG03030Y) ,  遺伝子操作  (EC02050B)

引用文献 (42件)：

• Food Microbiol; From field to fermentation: the origins of Lactococcus lactis and its domestication to the dairy environment; D Cavanagh, GF Fitzgerald, O McAuliffe; 47; 2015; 45-61; 10.1016/j.fm.2014.11.001; CR1;
• Trends Food Sci Technol; Lactic acid bacteria as functional starter cultures for the food fermentation industry; F Leroy, L Vuyst; 15; 2004; 67-78; 10.1016/j.tifs.2003.09.004; CR2;
• Curr Opin Biotech; Metabolic pathway engineering in lactic acid bacteria; M Kleerebezem, J Hugenholtz; 14; 2003; 232-237; 10.1016/S0958-1669(03)00033-8; CR3;
• Biotechnol Biofuels; A novel cell factory for efficient production of ethanol from dairy waste; J Liu, SH Dantoft, A Wurtz, PR Jensen, C Solem; 9; 2016; 33; 10.1186/s13068-016-0448-7; CR4;
• Appl Environ Microbiol; Use of native lactococci as vehicles for delivery of DNA into mammalian epithelial cells; VD Guimaraes, S Innocentin, F Lefevre, V Azevedo, JM Wal, P Langella, JM Chatel; 72; 2006; 7091-7097; 10.1128/AEM.01325-06; CR5;

タイトルに関連する用語 (5件)： 乳酸菌 ,  選択性 ,  シームレス ,  変異誘発 ,  開発