ヒト血清培地を用いるヒト骨髄由来間葉系幹細胞培養法

Inventor： , ,
Applicant, Patent owner：
Gazette classification：公開公報
Application number (International application number)：2004241741
Publication number (International publication number)：2006055106
Application date： Aug. 23, 2004
Publication date： Mar. 02, 2006
Summary：

【課題】ヒトに移植するための間葉系幹細胞を、ヒト骨髄液から安全且つ効率的に培養する方法を提供する。【解決手段】ヒト骨髄液を採取し、骨髄由来の間葉系幹細胞を培養して、ヒトに移植するためのヒト間葉系幹細胞を調製する方法であって、以下の工程を含むことを特徴とする方法:(i) 採取した骨髄液の分量に対して、濃度5〜15U/mL程度のヘパリン/緩衝液を80〜120%v/v添加する工程、(ii) 工程(i)で得られたヘパリン/緩衝液を添加した骨髄液を、ヒト血清を10〜20%v/v含むα-MEM培地で培養し、該培養中に少なくとも2回培地交換することにより培養液中に浮遊する血球成分を取り除く工程、および(iii) 細胞解離剤を用いて間葉系幹細胞を主とする細胞群を培養容器から選択的に剥離し、剥離された細胞群から間葉系幹細胞以外の接着細胞を分離し、別の容器で選択的に間葉系幹細胞を培養する工程。【選択図】図1

Claim (excerpt)：

ヒト骨髄液を採取し、骨髄由来の間葉系幹細胞を培養して、ヒトに移植するためのヒト間葉系幹細胞を調製する方法であって、以下の工程を含むことを特徴とする方法: (i) 採取した骨髄液の分量に対して、濃度5〜15U/mL程度のヘパリン/緩衝液を 80〜120%v/v添加する工程、 (ii) 工程(i)で得られたヘパリン/緩衝液を添加した骨髄液を、ヒト血清を10〜20 %v/v含むα-MEM培地で培養し、該培養中に少なくとも2回培地交換することにより培養液中に浮遊する血球成分を取り除く工程、および (iii) 細胞解離剤を用いて間葉系幹細胞を主とする細胞群を培養容器から選択的に剥離し、剥離された細胞群から間葉系幹細胞以外の接着細胞を分離し、別の容器で選択的に間葉系幹細胞を培養する工程。

IPC (9)：

C12N 5/06 , A61K 35/16 , A61K 35/28 , A61L 27/00 , A61P 3/10 , A61P 7/02 , A61P 9/04 , A61P 9/10 , A61P 9/14

FI (11)：

C12N5/00 E , A61K35/16 , A61K35/28 , A61L27/00 J , A61L27/00 V , A61P3/10 , A61P7/02 , A61P9/04 , A61P9/10 , A61P9/10 101 , A61P9/14

F-Term (47)：

4B065AA93X , 4B065BB02 , 4B065BB03 , 4B065BB08 , 4B065BB11 , 4B065BB12 , 4B065BB13 , 4B065BB14 , 4B065BB15 , 4B065BB20 , 4B065BB25 , 4B065BC11 , 4B065BC13 , 4B065BC42 , 4B065BD38 , 4B065BD45 , 4B065CA44 , 4C081AB04 , 4C081AB11 , 4C081BA12 , 4C081BA14 , 4C081CD062 , 4C081CD34 , 4C081CF011 , 4C081CF021 , 4C081CF031 , 4C081CF061 , 4C081CF151 , 4C081CF26 , 4C081CG02 , 4C081DA01 , 4C081DB03 , 4C081EA06 , 4C087AA01 , 4C087AA02 , 4C087AA03 , 4C087BB35 , 4C087BB44 , 4C087BB64 , 4C087MA67 , 4C087NA06 , 4C087NA07 , 4C087ZA36 , 4C087ZA44 , 4C087ZA45 , 4C087ZA54 , 4C087ZC35

Patent cited by the Patent：

Cited by applicant (5)

正常ヒト成熟肝細胞用培養液
Gazette classification：再公表公報 Application number：JP2001008168 Applicant：北海道ティー・エル・オー株式会社
invitroで培養された軟骨細胞によるヒト軟骨移植片の製造方法
Gazette classification：公開公報 Application number：特願2001-255410 Applicant：メルクパテントゲゼルシャフトミットベシュレンクテルハフトング
基底膜細胞外基質を用いた間葉系幹細胞の培養方法
Gazette classification：公開公報 Application number：特願2001-249652 Applicant：科学技術振興事業団, 加藤幸夫

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Cited by examiner (2)

特開昭63-301785
インプラントとその製造方法
Gazette classification：公開公報 Application number：特願平4-028525 Applicant：株式会社ニコン

Article cited by the Patent：

Cited by examiner (6)

Yonsei Medical Journal, 200406, Vol. 45, Suppl., p. 61-67
Artifical Organs, 200401, Vol. 28, p. 33-39
リウマチ科, 2003, Vol. 30, p. 430-435

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